1、一、原理可見光、紫外線照射某些物質，主要是由于物質分子中價電子能級躍遷對輻射的吸收，而產生化合物的可見紫外吸收光譜。
2、基于物質對光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法。
3、它是以朗伯──比耳定律為基礎。
(資料圖)
4、1朗伯—比耳定律A=lg—-=ECLT式中A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數，采用的表示方法是（E1％1cm），其物理意義為當溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm時的吸收度數值；C為100ml溶液中所含被測物質的重量（按干燥品或無水物計算），g；L為液層厚度，cm。
5、二、使用范圍凡具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物，根據在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。
6、三、儀器可見-紫外分光光度計。
7、其應用波長范圍為200～400nm的紫外光區、400～850nm的可見光區。
8、主要由輻射源（光源）、色散系統、檢測系統、吸收池、數據處理機、自動記錄器及顯示器等部件組成。
9、本儀器是根據相對測量的原理工作的，即先選定某一溶劑（或空氣、試樣）作為標準（空白或稱參比）溶液，并認為它的透光率為100％（或吸收度為0），而被測的試樣透光率（或吸收度）是相對于標準溶液而言，實際上就是由出射狹縫射出的單色光，分別通過被測試樣和標準溶液，這兩個光能量之比值，就是在一定波長下對于被測試樣的透光率（或吸收度）。
10、本儀器可精密測定具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物、有色物質或在適當條件下能與某些試劑作用生成有色物的物質。
11、使用前應校正測定波長并按儀器說明書進行操作。
12、四、儀器的校正1.波長的準確度試驗以儀器顯示的波長數值與單色光的實際波長值之間誤差表示，應在±1.0nm范圍內。
13、可用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正。
14、2.吸收度的準確度試驗3.雜散光的試驗4.波長重現性試驗5.分辨率試驗五、測定方法1.對照品比較法（1）按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的100±10%，所用溶劑也應完全一致，在規定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度后，按下式計算含量，即得。
15、（2）計算式A樣×G對/稀釋倍數×100×1含量（%）=————————————--×100%A對×G樣/稀釋倍數×100×12.吸收系數法（1）按各品種項下的方法配制供試品溶液，在規定的波長處測定其吸收度，再以該品種在規定條件下的吸收系數計算含量。
16、用本法測定時，應注意儀器的校正和檢定。
17、（2）計算式A樣含量（%）=——————————————-×100%G樣/稀釋倍數×(E1％1cm)對×100×13.計算分光光度法采用計算分光光度法應慎重。
18、本法有多種，使用時均應按各品種項下規定的方法進行。
19、當吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，波長的微小變化可能對測定結果造成顯著影響，故對照品和供試品測試條件應盡可能一致。
20、若測定時不用對照品，如維生素A測定法，則應在測定時對儀器作仔細的校正和檢定。
21、六、注意事項1.空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。
22、如有渾濁，應預先過濾，并棄去初濾液。
23、2.測定時，除另有規定外，應以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池。
24、3.在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規定外，吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內；否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的準確度，并以吸收度最大的波長作為測定波長。
25、4.一般供試品溶液的吸收度讀數，以在0.3～0.7之間的誤差較小。
26、5.吸收池應選擇配對，否則要引入測定誤差。
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